Attune™ CytPix™

Attune CytPix Akış Sitometresi, Attune NxT modeliyle ortak özellikleri paylaşan gelişmiş bir hücre analizörüdür.

Ayırt edici özelliği, akış hücresinden geçerken bireysel olayların görüntülerini kaydeden yüksek hızlı bir aydınlık alan kamerasıdır. Kamera ve Attune Sitometrik Yazılımı, analiz ettiğiniz olayların ikililer, kümeler veya kalıntılar yerine tek hücreler olmasını sağlamaya yardımcı olur. Bu, hücre ve gen terapisi araştırma uygulamalarında çok önemlidir, ancak araştırmacıların analiz için tanımlanan her hücre popülasyonunun morfolojisini anlamalarına yardımcı olmak için hemen hemen her akış sitometrisi deneyinde yararlıdır. Görüntüler ayrıca enkazın belirlenmesine ve protokollerin optimize edilmesine yardımcı olabilir.









 

Nasıl çalışır?

Örnekler Attune CytPix Akış Sitometresinde alınırken, yüksek hızlı kamera bir olay örneğinin görüntülerini yakalar ve saklar. Daha fazla esneklik için Attune Cytometric Software, görüntü yakalama frekansını gerektiği gibi ayarlamanıza olanak tanır ve akış hızına ve görüntü boyutuna bağlı olarak saniyede 6.000'e kadar görüntü yakalayabilir. Akustik odaklama, hücrelerin keskin bir görüntü elde edilecek şekilde konumlandırılmasına yardımcı olur.

Akustik odaklama hücreleri optimum görüntüleme için konumlandırır

Akustik odaklama olmadan, boncuklar merkezden uzakta ve genellikle bulanık görünür. Akustik odaklama, keskin bir görüntü elde etmek için yanal konum varyasyonunu, zamansal varyasyonları ve alan derinliği sınırlamalarını azaltır.






















Numune akış hızından bağımsız olarak optik odak korunur. Olayları 1.000 µL/dakikaya kadar akış hızlarında görüntüleyebilir ve odak, görüntüleme penceresi ve aydınlatma ayarlarını hedef hücre türünüze göre ayarlayabilirsiniz.
Akış verilerini elde ederken hücre popülasyonlarının görüntülerini yakalamak, hücre görüntülerini seçmenize ve bunları nokta grafiğinde veya histogramda geri almanıza olanak tanır.

Bu, kümeleri, istenmeyen hücreleri ve enkazı hariç tutarken ilgili hücreleri dahil etmek için kapılarınızı ayarlamanıza olanak tanır. Kapıları ayarlamak ve doğrulamak için entegre hücre ölçüm aracından gelen verileri floresan ve ışık saçılım sitometrisi ile birleştirebilirsiniz.

Görüntüleme ile Geliştirilmiş Akış Sitometrisi Uygulamaları

Gate doğruluğunu onaylayın.
Görüntüleme, gate için  yalnızca ilgilenilen tek hücreleri içerecek şekilde doğrulamak ve ayarlamak için kullanılabilir. Örneğin, tavuk eritrosit çekirdeği (CEN) hücreleri, herkesin bildiği gibi yapışkandır ve çiftler veya diğer kümeler halinde kümelenme eğilimindedir. Araştırmacılar genellikle bu kümeleri, ardışık tepe noktalarının bir olaydaki hücre sayısına karşılık geldiği propidyum iyodür (PI) tahlillerini kullanarak tanımlar. Ancak görüntüleme, bir sonraki seviye kümelerinin önceki zirvelerin sağ omuzlarında görünmeye başladığını ortaya koydu. Örneğin, pik I'in sağ omzu (yalnızca teklileri içerdiği varsayılır) birçok ikili içeriyordu. Kapıların sıkılması, istenmeyen çiftlerin başarılı bir şekilde çıkarılmasını ve bunları uygun şekilde bir sonraki kapıya kaydırmayı sağladı.

















Hücre popülasyonlarını karakterize edin.
Görüntülerden elde edilen morfolojik bilgiler, akış sitometrisi verilerinin zenginliğine katkıda bulunabilir. Örneğin, şekil, morfolojik olarak farklı özellikleri ortaya çıkarmak için her popülasyondaki hücreleri karakterize etmek için hücre görüntüleme ekleyerek Annexin V ve PI kullanan başka türlü geleneksel bir apoptoz tahlilini gösterir. Bu içgörüler tek başına multipleks boyamadan elde edilemezdi.















 

Apoptotik hücrelerin morfolojik özellikleri.
Jurkat hücreleri apoptozu indüklemek için 10 uM kamptotesin ile 4 saat 37°C'de inkübe edildi. Örnekler Annexin V ve PI ile boyandı ve Attune CytPix Akış Sitometresinde 100 uL/dakikada alındı. Tekli popülasyondan, geçitleme stratejileri üç hücre alt popülasyonu tanımladı. Apoptotik canlı hücrelerin yaklaşık %50'si (Annexin V+PI–, sağ alt), kabarcıklar gibi bir tür apoptotik cisim gösterdi. Apoptotik ölü hücrelerin yaklaşık %25'i (Annexin V+PI+, sağ üst) artmış hücre yüzeyi tanecikliliği gösterdi ve daha fazla kısmi hücre vardı. Sağlıklı hücrelerin yaklaşık %10'u (Annexin V–, sol alt) apoptotik cisimler gösterdi (Ancak Annexin V+ hücreleri arasında gözlemlenenler kadar şiddetli olmasa da). Bu sağlıklı hücreler ayrıca morfolojik olarak çeşitliydi ve yukarı yönde tekli kapılamaya rağmen bazı çiftler içeriyordu. Görüntülerdeki morfolojik özellikler siyah oklarla belirtilmiştir.

Hücreden hücreye etkileşimler
Görüntüleme, hücreler arasındaki etkileşimleri bile gösterebilir. Şekilde, tasarlanmış CAR T immünoterapi hücreleri, Ramos (lenfoma) hücreleri ile birlikte inkübe edildi ve boyandı, elde edildi ve Attune CytPix Akış Sitometresinde görüntülendi. Çeyrek Q2'den alınan görüntüler (tek bir olay olarak elde edilen her iki leke için de pozitif), CAR T hücrelerinin gözle görülür şekilde Ramos hücrelerini hedeflediğini, tasarlanmış hücre potansiyelinin açık kanıtını gösterir.

















 

Analiz fırsatlarını keşfedin.
Attune CytPix Akış Sitometresinde görüntülenen hücreleri arkaya yerleştirmek, yalnızca akış sitometrisi verilerinden görülemeyecek ilginç alt popülasyonları keşfetmek için morfolojik özellikleri kullanmanıza da olanak tanır.

Örneğin, zaman içinde inkübe edilen E. coli hücreleri, iki tip koloni oluşturan üniteye (CFU'lar) dönüşür: tek hücrelere benzeyen kısa CFU'lar ve her bir yaklaşık hücre uzunluğunda tamamlanmamış daralmayı temsil eden, tamamlanmamış fisyon halkalarına sahip uzun yapılar. Ne geleneksel bir tekli kapı (SSC-A'ya karşı SSC-H) ne de bir floresan kapısı (SSC'ye karşı çekirdekli leke) bu popülasyonları yeterince ayırmaz. Ancak Attune CytPix görüntüleme ile geliştirilmiş akış sitometresi ile görüntüleri görüntüleyebilir ve gruplayabilir ve CFU türlerini morfolojik özelliklerine göre kapılayabilirsiniz.















Hücre kültürü QC. Kalite kontrol (QC) iş akışlarına hızlı görüntüleme eklemek, hücre kültürü sorunlarını sürecin başlarında algılayabilir ve izleyebilir. Örneğin bir laboratuvarda, bir Ramos (lenfoma) hücre kültürünün rutin geçiş kontrolü, birleşik görünmesine rağmen hücre sayılarının ve hayatta kalmanın azaldığını gözlemledi. Daha fazla araştırma, önemli miktarda mikrobiyal kontaminasyon ortaya çıkardı, ancak ne zaman ve nerede başladı?

Hücre dizisi daha önce Attune CytPix Akış Sitometresinde analiz edildiğinden, araştırmacılar görüntülere geri döndüler ve mikrobiyal enfeksiyonu en az beş gün önce belgeleyebildiler. O zaman, erken belirtiler enkaz olarak reddedildi, ancak geriye dönük değerlendirme, kültürdeki sorunlu hücrelerle ortak özellikler gösterdi. Enfeksiyonun izlenmesi, laboratuvarın tahlil açısından kritik hücre hatlarının taranması ve korunması için ek laboratuvar prosedürleri oluşturmasına yardımcı oldu.













Daha fazla bilgi için tıklayınız.